Detecção de Mycobacterium leprae por PCR para o suporte no diagnóstico clínico da hanseníase / Detention of Mycobacterium leprae for PCR for the support in the clinical diagnosis of leprosy

A hanseníase é uma doença causada pelo Mycobacterium leprae, uma bactéria intracelular que infecta macrófagos na pele e células de Schwann nos nervos. Trata-se de uma doença de apresentação espectral onde são observadas formas multi- (MB) e paucibacilares (PB), em qual o diagnóstico é baseado no exame clínico, histológico e bacteriológico. Não obstante, a forma neural pura (PNL) é de difícil diagnóstico devido a lesões de pele estarem sempre ausentes e os bacilos no nervo não serem facilmente detectados através de métodos tradicionais (baciloscopia e histologia). Desse modo, a reação da polimerase em cadeia (PCR) tem sido utilizada como método de suporte alternativo para o diagnóstico da hanseníase. Neste trabalho, um novo método para a extração de ácidos nucléicos utilizando o reagente comercial Trizol foi padronizado e sua eficiência comparada ao método de extração que utiliza proteinase K através da PCR. Nesse sentido, análises comparativas foram realizadas entre a PCR convencional e a tecnologia da PCR em tempo real (SYBR Green e LUX) para a detecção de M. leprae em 147 amostras de biópsias de pele e nervo. Dos quatro sistemas padronizados três (PCR convencional, SYBR e LUX) tiveram como alvo para a amplificação a região intergênica 85 A-C (fbpA-fbpC) e, um sistema em tempo real (LUX) teve como alvo a região do Ag 85 B (fbpB). A padronização dos testes confirmou que os iniciadores desenhados para todos os sistemas testados apresentaram sensibilidade e especificidade molecular para a amplificação do M. leprae. Além disso, o Trizol demonstrou ser um reagente confiável para a obtenção de ácidos nucléicos de boa qualidade para a amplificação de M. leprae por PCR a partir de amostras de biópsias de pele, embora a taxa de detecção, especialmente em pacientes paucibacilares, tenha sido menor quando comparada ao método da Proteinase K. Surpreendentemente, em biópsias de nervo não houve diferenças entre os dois métodos de extração de DNA. Desse modo, foi feita uma comparação entre a positividade dos sistemas de PCR em 67 biópsias processadas com Trizol e demais critérios laboratoriais para o diagnóstico. Destes pacientes 34 (59,6 por cento) foram diagnosticados como PNL. Os dados demonstraram que a associação entre a PCR convencional e o sistema LUX 85 B foi capaz de detectar onze novos casos que foram negativos para todos os outros critérios, o que representou um incremento de 32,3 por cento (11/34) na taxa de detecção...

Detection of Mycobacterium leprae DNA by polymerase chain reaction in the blood and nasal secretion of Brazilian household contacts

DNA samples from blood and nasal swabs of 125 healthy household contacts was submitted to amplification by polymerase chain reaction (PCR) using a Mycobacterium leprae-specific sequence as a target for the detection of subclinical infection with M. leprae.All samples were submitted to hybridization analysis in order to exclude any false positive or negative results. Two positive samples were confirmed from blood out of 119 (1.7 percent) and two positive samples from nasal secretion out of 120 (1.7 percent). The analysis of the families with positive individuals showed that 2.5 percent (n = 3) of the contacts were relatives of multibacilary patients while 0.8 percent of the cases (n = 1) had a paucibacilary as an index case. All positive contacts were followed up and after one year none of them presented clinical signs of the disease. In spite of the PCR sensitivity to detect the presence of the M. leprae in a subclinical stage, this molecular approach did not seem to be a valuable tool to screen household contacts, since we determined a spurious association of the PCR positivity and further development of leprosy.